Sonstige Begründung
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Das Massenspektrometer muss aus drei Massenanalysatoren bestehen, von denen der erste auf der Quadrupol-Technologie, der zweite auf der Orbitrap-Technologie und der dritte auf der mrTOF-Technologie basiert. Jeder Massenanalysator muss in der Lage sein, nacheinander oder parallel zu den anderen zu arbeiten. Das Massenspektrometer muss zwei unabhängige HRAM-Massenanalysatoren haben, von denen einer auf der mrTOF-Technologie und der andere auf der Orbitrap-Technologie basiert. Die Massenanalysatoren müssen unabhängig voneinander oder im Zusammenspiel mit den anderen arbeiten. Alle drei Massenanalysatoren müssen in der Lage sein, Massenanalysen in Echtzeit durchzuführen, und Orbitrap und mrTOF müssen in der Lage sein, Ionen in Echtzeit zu detektieren und Daten zu verarbeiten, was eine hohe Spektrengenerierungsrate ermöglicht. Das Massenspektrometer muss in der Lage sein, eine parallele Detektion durchzuführen; innerhalb einer Minute Analysezeit sollte es in der Lage sein, unter definierten Bedingungen mindestens 50 vollständige Spektren mit einer Auflösung von 240.000 FWHM bei m/z 200 mit dem Orbitrap-Detektor und 12.000 datenunabhängige MS/MS-Spektren der mit dem Quadrupol isolierten, im Ionenprozessor fragmentierten und mit dem zweiten Analysator detektierten Mutterionen zu erfassen. Das Massenspektrometer muss in der Lage sein, Vorläuferionen mit einem Quadrupol-Massenanalysator zu isolieren. Das Massenspektrometer muss in der Lage sein, Ionen mit dem Quadrupol-Massenanalysator mit einer Isolationsbreite von 0,4 Th bis 2000 Th zu isolieren. Das Massenspektrometer muss über eine direkte Kommunikation und Softwareintegration mit einem Vanquish-Neo UHPLC-System verfügen. MS-Auflösung von 480.000 FWHM bei m/z 200 bei einer Erfassungsrate von 1 Hz. Die Orbitalfalle muss in der Lage sein, bei m/z 200 im Full-Scan-Modus eine Auflösung von >480.000 zu erreichen. Für das Massenspektrometer sollten keine Kryogene benötigt werden. Nach einer Injektion von 250 pg verdautem HeLa- oder K562-Zelllysat-Standard (Pierce, Promega) auf eine Säule mit direkter Injektion (Vanquish Neo) und einer 40-SPD-Methode sollte das Massenspektrometer nach einer Datenbanksuche mit der DIA-NN-Software 1.8.2 ohne Spektrenbibliothekssuche und ohne Abgleich zwischen den Läufen die folgenden Mindestleistungswerte liefern 31000 Vorläufer oder 5400 identifizierte Proteingruppen mit 1 % FDR auf Proteingruppenebene. Suchparameter für DIA-NN 1.8.2: 31000 Vorläufer oder 5400 identifizierte Proteingruppen mit 1 % FDR auf Proteingruppenebene. Suchparameter für die Datenbanksuche mit DIA-NN 1.8.2: Humane Uniport-Referenzdatenbank, Kontaminanten-Datenbank, 1 Miss-Cleavages, max. 1 Modifikation pro Peptid, N-terminale M-Exzision, Ox-M, Ac-N, MS1 Massenbereich: 400-800 mz, MS2-Massenbereich: 150-2000 mz, Precursor FDR 1%, Massengenauigkeit und MS1-Massengenauigkeit 0, heuristische Protein-Interferenz, keine gemeinsamen Spektren, Verwendung von Isotopologen, Protein-Interferenz - Isoform-IDs, neuronaler Netzwerkklassifikator im Single-Pass-Modus. Relevante Patentschriften DE112013000722 (B4), DE112013000726 (B4), 8B2515407 (B), 8B2512773 (B); 8B2575169 (B); EP3410463 (B1); DE112004001794 (B4), DE112004003144 (B4), DE112004003145 (B4), 8B2420009 (B); EP1900002 (B1 ), EP3142140 (B1 ), 8B2434484 (B), 8B2441681 (B); EP1894226 (B1); EP2372747 (B1).